双链RNA (dsRNA) 抗体及ELISA试剂盒常被应用于mRNA产品的质控环节。dsRNA抗体包括J2单克隆抗体(Anti-dsRNA mAb J2),J5单克隆抗体(Anti-dsRNA mAb J5),K1单克隆抗体(Anti-dsRNA mAb K1)和K2单克隆抗体(Anti-dsRNA mAb K2),其中J2抗体是dsRNA检测的金标准。J2抗dsRNA IgG2a单克隆抗体已成为dsRNA检测的J标准。
艾美捷双链RNA定量试剂盒使用的两种dsRNA抗体如下:
雌性DBA/2小鼠腹腔注射50ug L-dsRNA
和75ug甲基化牛血清白蛋白的混合物,在完全弗氏佐剂中乳化。
在几次增强后,将脾细胞与Sp2/0-Agl4骨髓瘤细胞融合以产生杂交瘤克隆J2和K2。
艾美捷双链RNA定量试剂盒包含以下试剂,用于200次测试(2x96孔):
试剂01:1小瓶包衣抗体(储存于-20℃
试剂A:1小瓶142 bp dsRNA作为阳性对照(储存于-20℃)
试剂B:1小瓶dsRNA特异性检测抗体(在RPMI+5%FBS中,储存在+4℃或最好是-20℃)
试剂C:1小瓶HRP缀合的F(ab’)2山羊抗小鼠二级抗体片段(储存于+4℃或-20℃)
试剂D:1小瓶TMB底物溶液(储存于+4℃,避光
艾美捷双链RNA定量试剂盒原理:
基于使用两种双链 RNA (dsRNA) 特异性单克隆抗体,dsRNA 检测试剂盒可以灵敏和选择性地检测 dsRNA 分子(大于 30-40 bp),而不受其核苷酸组成和序列的影响。检测具有高度特异性:在存在 1.000-10.000 倍过量其他核酸的情况下,可以检测核酸提取物中的dsRNA。该测定基于双抗夹心ELISA原理,使用 J2 (IgG2a) 小鼠单克隆抗体作为捕获抗体,单克隆抗体 K2 (IgM) 用作检测抗体。
艾美捷双链RNA定量试剂盒原理:
基于使用两种双链 RNA (dsRNA) 特异性单克隆抗体,dsRNA 检测试剂盒可以灵敏和选择性地检测 dsRNA 分子(大于 30-40 bp),而不受其核苷酸组成和序列的影响。检测具有高度特异性:在存在 1.000-10.000 倍过量其他核酸的情况下,可以检测核酸提取物中的dsRNA。该测定基于双抗夹心ELISA原理,使用 J2 (IgG2a) 小鼠单克隆抗体作为捕获抗体,单克隆抗体 K2 (IgM) 用作检测抗体。
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