一、交叉反应

交叉反应物主要考虑因素包括：

1）结构类似物，由于反应原理的相似性，结构类似物是交叉反应验证的重要部分，如具有同源性的抗原结构、具有同源性序列的核酸片段、核酸序列相近或具有同源性的野生型或其他突变类型序列、检测范围外的型别、同类药物中的所有药物/化合物和药物代谢物、以及易共存的其他类似物。如CYP2C19药物代谢酶基因多态性检测试剂应对靶标的同源性序列（CYP2C19的其他突变序列、CYP2C9基因序列等）进行交叉反应验证；EGFR突变基因检测试剂应对EGFR基因不同序列、HER家族不同基因、不同浓度的野生型人DNA样本、非人类基因组基因等进行交叉反应验证。

2）易引起相同或相似的临床症状的其他病原体、相同或相似的临床症状出现时，体内易升高的其他蛋白、采样部位正常寄生或易并发的其他微生物（包含近缘微生物）。如冠状病毒检测试剂盒应考虑易引起相似临床症状的流感病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒、诺如病毒等；病原体抗体检测试剂盒需考虑高浓度病原体特异性IgG抗体与特异性IgM抗体的交叉反应；不同采样部位的正常寄生微生物，如宫颈拭子样本应选择在人类泌尿、生殖道寄生微生物或病原体，鼻拭子样本应选择呼吸道常见微生物。

3）原材料设计可能引入的其他因素：如原材料为鼠源单抗，则应验证人抗鼠抗体（HAMA）的交叉反应；如检测试剂采用基因重组抗原，应增加对重组基因导入微生物特异性抗体的交叉反应评价。

4）交叉反应验证的样本，应尽量采用临床样本或病原体培养物。根据产品特点选择潜在的交叉反应物质进行验证，一般建议选择高浓度交叉反应物水平进行验证，细菌或者真菌的最低浓度为10⁶CFU/mL；病毒的最低浓度为10⁵PFU/mL；人野生型DNA至少包含100 ng/μL野生核酸样本。对于交叉反应中病原体的最低浓度，生产商也可根据病原体的具体特性规定相应浓度及浓度单位，应提供用于所有用于交叉反应验证的病原体的制备方法、来源、种属和浓度信息，可选择已上市产品进行确定，如无已上市产品，也可通过企业自建的稳定合理方法确认。

二、干扰试验

1）干扰物质类型：干扰物质本身一般不能与试剂产生反应，但能干扰待测分析物在检测系统中的反应效率，从而影响试验结果的准确性。干扰因素主要包括内源性干扰和外源性干扰，内源性干扰主要为正常生理和病理状态下的人体代谢产物，外源性干扰物主要为常用药物及其代谢物、患者群体使用的药物及其代谢物、样本采集或处理过程中接触到的物质如抗凝剂、防腐剂等。

2）干扰物质举例：样本类型为血清、血浆、全血的检测试剂盒，常见内源性干扰物主要包括血红蛋白、脂类、胆红素、胆固醇、自身抗体、疾病相关蛋白、患者体内异常的生化代谢物等；常见的外源性干扰物质包括血浆/全血样本抗凝剂、常用药物等。以鼻拭子为受检样本的呼吸道病原体检测试剂盒，内源性干扰主要包括鼻分泌物或黏液，如粘蛋白、血液，外源性干扰主要包括鼻咽部局部药物、全身性药物如抗病毒药物、抗生素等；尿液样本干扰物需考虑尿液中常见代谢物、pH等。

3）干扰物质的验证：一般采用添加干扰物质的样本进行研究，为避免基质效应，如干扰物质与适用样本不同，则添加量宜少于总体积的5%。首先对可疑干扰物质采用临床样本中的最高浓度（最差情形）进行干扰筛查或验证，一般采用配对比对的方式，比较添加与未添加高浓度干扰物质的样本检测结果的差异。如果差异超出接受范围或对检测结果有显著性影响，可确认该物质为干扰物质，可进一步评估该干扰物质浓度与干扰程度之间的关系；如果差异在接受范围内或对临床无显著性影响，可认为该浓度的物质不产生干扰，在产品说明书中明确不产生干扰的物质浓度上限。干扰实验建议采用包含弱阳性水平在内，至少两个分析物水平的样本，可反映干扰物质对临界阳性水平检测的干扰。

综上所述，产品申报前应进行充分的临床背景调查，最大限度模拟临床应用中可能出现的场景，依据产品特性全面选择潜在的交叉干扰物质。