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新冠抗体检测不准的真正原因|胶体金快诊行业20年老兵有话说

新冠疫情,着实让胶体金检测这个不起眼的行业的信心爆棚。虽然我入行多年,一年前,承蒙医业观察自媒体转载一篇拙文,颇有一语中的味道。

参考《新冠疫情检测大考后,谁还敢说胶体金快诊产品过时了?》

但是,因为资源有限,行事保守优柔寡断,还是没有跟上市场的节拍。自己很有一种踏空的感觉。随着近日有关新冠抗体检测在实战中出现的一些问题,国家药监局采取了一些法规上的严控措施,我是技术控,生物理工男,不太懂政策,只能谈谈自己对这个产品的技术方面的诸多思考。或许能够给业内的同行提供一些参考。




人在感染新冠病毒后,免疫的缘故,血清中就会出现IgM和IgG抗体,其中IgM是早期的抗体,IgG是后期的抗体,就是网上频繁出现的那个著名的双曲线图,通过这次疫情的科普,外行的人都已经能看得懂。虽然出现抗体的时间有一个窗口期,对于早期筛查诊断有一些延缓,但是,作为目前针对新冠的辅助诊断还是有一定的意义,只不过是有些瑕疵而已。胶体金侧向层析的产品,快速,灵敏准确,更重要的是操作简便,适合现场大规模的筛查。用于目前的新冠筛查,可以说是再恰当不过了。但是,当我看到众多的厂家都在推出侧向层析产品,采用侧向层析的两条T线IgM/IgG的模式,我心中不免有些困惑了。


那一晚,辗转反复。记忆这个不速之客,又来敲我的心门。


此事让我想起一个古老的胶体金检测产品,结核抗体的检测。目前的产品还在采用渗滤的方法,其原理是通过结核的LAM抗原来检测人血清中的抗体,来确定是否感染了结核。与侧向层析方法相比较,渗滤法操作多了几个洗涤的步骤。


那么为什么要采用繁琐的渗滤法而不用更为简单的侧向层析法来检测结核抗体呢?


让我们来剖析一下侧向层析检测抗体的原理:首先,在NC膜上包被二抗,也就是抗人的IgM或IgG,胶体金标记抗原,也就是目前的N蛋白或S蛋白,当加入人体血样本时,如果含有特异性的抗体(抗N或抗S),会和标记的蛋白结合,沿NC膜层析开始流动,被固化的二抗捕获而形成检测线,呈阳性。反之,则为阴性。检测线的信号强弱与样本中的抗体含量呈线性关系。咋看起来,完美无缺。


有些事,不能细琢磨,所谓细思极恐!


我们都知道,正常的血清中含有大量的IgG,而免疫刺激后产生的所谓特异性抗体最多不到十分之一,那么,当你加入血清样本后,特异性的抗体会和标记的蛋白结合,当样本流动到包被区时,二抗除了捕获胶体金结合物外,同时也会捕获样本中的非特异性抗体,二者具有竞争的关系,而且,非特异性抗体在数量上具有压倒性优势。最终的结果是测不出,假阴性。


所以,目前好多厂家都强调加样的量要严格控制,抗原标记量要尽量增大。我想,效果不会太好。上面讲的是IgG检测,至于IgM,正常样本中的IgM含量可能没有那么多,正常只有IgG含量的十分之一左右。这种干扰状态可能会好一些。


另外,采用标记抗原的方法,最大的弊端是在一个胶体金微粒上面会同时有IgG和IgM和抗原结合,当然,IgG占大部分,这样的话,倘若这个金颗粒被前端的抗人IgG捕获,会严重地减弱IgM的检测信号,反而会弄巧成拙。


再回到结核抗体检测的话题,渗滤法是将LAM抗原包被在膜上,再加以封闭。先加样本,让特异性的抗体与LAM抗原相结合,再洗涤,将不结合的非特异性抗体洗掉(这一步是关键所在),最后再加标记的二抗结合出现红色的斑点信号。因此,结核抗体的检测市场一直都以渗滤法为主流,虽然貌似落后的方法,但是准确性和灵敏度还是有保证的。记得当年新加坡的MP公司曾经做过一款两步法的双向层析的产品,是先加样本,通过层析捕获特异性抗体,再从另一端层析加标记二抗。其主要原因就是要解决上述的技术问题。


通过层析法检测特异性的抗体,还有更加经典的双抗原夹心的方法,是一种真正的特异性检测方法,但是它不能区分出是IgG还是IgM,在HIV和丙型肝炎的检测上已经广泛地使用,技术上也很成熟。


现在总结一下,新冠抗体的检测,如果单纯地去检测IgM,如果样本中的特异性IgM含量足够的高,应该可以测得出,但是,如果要检测IgG,基本上是很难测出来。


所以,目前侧向层析的产品,双T线的设计,IgG基本上是画蛇添足,摆设而已。即使是单T线(IgM)设计,也是有很大的瑕疵,因为样本中的非特异性的IgM的干扰,导至灵敏度不会太高。如果此时感染其它疾病,非特异性IgM含量增高,情形会更加糟糕。其中的原因已经解释的很清楚了。顺藤摸瓜,抽丝剥茧,或许,这就是目前一些假阳或假阴案例的真相。


所谓产品应急注册通道,没有强大的临床验证作为基础,终究还是空中楼阁,坍塌是迟早的事,监管部门的政策酿成的苦果,还是要他们自己来收拾这个烂摊子。行政干预和技术调和,就是一团烂泥。


做胶体金几十年了,觉得行业的人气正在逐渐凋零,如果回到十年前,像此类产品的瑕疵肯定会有人出来质疑,可如今却大行其道,抑或仍有高人在江湖游走,曲高和寡,只不过看见的是皇帝的新装。而我,只是一个盲目较真的理工男。


希望此文作为引玉之砖,活跃一下技术层面的探讨,只是一篇别无它意的调侃。


作者:胡小龙

上海八通生物科技股份有限公司   

上海八通生物科技股份有限公司长期致力于体外诊断快速检测产品的研发、生产和销售。尤其是在胶体金和荧光定量检测方面,八通生物在毒品检测和食品安全检测领域的产品都有卓越的表现。公司的理念是将技术做到极致,打造POCT产业的闭环。细分行业,做深做透。